Ricerca del sito di origine e del ruolo patogenetico degli anticorpi anti-transglutaminasi epidermica nella Dermatite Erpetiforme

Dermatitis herpetiformis (DH) is an inflammatory skin disease characterized by granular IgA deposits in the papillary dermis and represents an extra-intestinal manifestation of coeliac disease (CD). DH and CD are autoimmune diseases, both share a similar genetic HLA background, have serum IgA antibodies and benefit clinical improvement with a gluten free dietary treatment. The epidermal transglutaminase (TG-3) has been recognised as the main autoantigen in DH disease. In this study the presence and the production of TG-3 protein at intestinal and peripheral level are demonstrated. This evidence induced us to investigate the origin’s site of TG-3 antibodies in both areas. To carry out a project, the antibody-Libraries display technologies are used. Antibody-Libraries from intestinal and peripheral B lymphocytes of three DH and three control patients were constructed and examined by using the phage and yeast-display antibody methods. The combination of these technologies allowed to isolate and characterize anti-TG-3 antibodies, suggesting that both, intestinal and peripheral level, could be the primary site of antibodies production. The present study also focused on investigating the pathogenetic role of anti-TG-3 antibodies in DH disease. Human keratinocytes, representing the inflammatory site of DH, are proposed as a suitable in vitro model. The TG-3 protein is detected in the intracellular compartment but not in the plasma membrane, suggesting that the antigen-antibody binding site does not occur on keratinocytes. Therefore, this in-vitro model does not allow to investigate the pathogenetic role of anti-tg3 antibodies.

La Dermatite Erpetiforme (DE) è una malattia infiammatoria cutanea caratterizzata da vescicole papulari pruriginose e da depositi granulari di IgA in corrispondenza delle papille dermiche o lungo la giunzione derma-epiderma. La malattia è considerata la manifestazione cutanea della celiachia, condividendo con quest’ultima l’origine autoimmune, la predisposizione genetica, la presenza di autoanticorpi IgA a livello sierico e la remissione clinica in seguito all’eliminazione del glutine dalla dieta. La transglutaminasi 3 o epidermica (TG-3 or eTG) rappresenta l’antigene verso cui si sviluppa la reazione autoimmunitaria. Il primo scopo di questo studio è indagare l’origine degli autoanticorpi contro la TG-3, e a tal fine è stata utilizzata la tecnologia delle librerie anticorpali. La fisiologica presenza e produzione dell’antigene riscontrata sia a livello intestinale che periferico, ha suggerito, la possibile genesi degli anticorpi anti TG-3 in entrambi i distretti. Librerie anticorpali, costruite da linfociti B intestinali e periferici di tre pazienti con DE e di tre soggetti di controllo, sono state analizzate mediante il metodo del phage-display e dell’yeast-display. L’approccio utilizzato ha permesso di isolare anticorpi anti TG-3 da entrambi i distretti. Il presente studio si è focalizzato, inoltre, sull’indagine del ruolo patogenetico degli anticorpi anti-TG-3 sulla pelle. A tal fine è stato ideato un modello in vitro, costituito da una linea cellulare primaria di cheratinociti umani. Gli esperimenti di immunofluorescenza e di monitoraggio in Real-Time dopo stimolazione con anticorpi anti-TG-3, hanno escluso la presenza dell’antigene sulla membrana plasmatica. Ne consegue che in questo distretto cellulare non può avvenire il legame tra l’antigene e il suo anticorpo. I risultati osservati e il modello proposto non hanno permesso, pertanto, di indagare ulteriormente il ruolo patologico di questi anticorpi.